纸层析法鉴定胡萝卜素

纸层析法是一种常用的分离和鉴定胡萝卜素类化合物的方法。这种方法依赖于不同胡萝卜素分子在层析过程中的移动速度差异来实现分离。以下是纸层析法鉴定胡萝卜素的一般步骤和注意事项：

称取适量的新鲜叶子（如2g），放入研钵中，加入丙酮（5ml）和少许碳酸钙（防止叶绿素被破坏）及石英砂（帮助研磨），研磨成匀浆。

加入5ml丙酮，过滤得到色素提取液。

取2×20cm的滤纸条，剪去两侧，中间留一长约1.5cm，宽约0.5cm的窄条。

在滤纸剪口上方折叠出一条直线，作为画滤液细线的基准线。

用毛细吸管沾少许滤液在折线上描绘4~5次，注意要画得匀、直、细，每次画完细线要等其自然变干后再画第二根线。

在大试管中加入四氯化碳（3ml）及少许无水硫酸钠（即层析液）。

将滤纸条固定于软木塞上，插入试管内，使窄端浸入溶剂中（色素点要略高于液面，滤纸条边缘不可碰到试管壁），盖紧软木塞，直立于阴暗处进行层析。

经过0.5—1小时后，观察分离后色素带的分布。最上端橙黄色为胡萝卜素，其次黄色为叶黄素，再下面蓝绿色为叶绿素a，最后的黄绿色为叶绿素b。

层析完成后，取出滤纸条，使石油醚自然挥发后观察层析带。不同颜色的色素带在滤纸条上的位置不同，从而可以鉴定出不同种类的胡萝卜素。

注意事项：

滤纸条应事先干燥，以保证层析过程中色素的均匀扩散。

点样过程应快速细致，形成的小圆点的直径不大于2mm。

点样时应重复几次，以确保结果的准确性。

层析液不能没及滤液基线，否则点样处的有机成分会溶解在层析液中。

层析过程中，层析液易挥发，故应在上方用玻璃盖盖严，以防止层析液挥发。

通过以上步骤和注意事项，可以有效地利用纸层析法鉴定胡萝卜素，并区分出不同种类的色素。