西红柿植物组织培养方法
西红柿植物组织培养方法主要包括以下步骤:
种子消毒与萌发
消毒:将番茄种子用75%的乙醇浸泡消毒5分钟,然后用4%的次氯酸钠浸泡消毒10分钟,最后用无菌水洗涤7-8次。
萌发:将消毒后的种子播种在种子萌发培养基(T0)中,保持适宜的温度和光照条件,待种子萌发出白色小芽后进行取材用于组织培养。
外植体选取与预培养
选取:选取健康、无病虫害的番茄植株,预处理清洗、消毒、去表面污垢。优选番茄的茎尖和子叶作为外植体,因为这些部位再生能力强,遗传稳定性好。
预培养:将外植体置于预培养培养基上,培养基上提前铺好滤纸,子叶背面朝上放置,摆放间隔以5-10mm为宜。
共培养与愈伤组织诱导
共培养:将预培养2天后的外植体浸泡于含有重组质粒的农杆菌侵染液中,浸泡期间需不断震荡,侵染5分钟后倒掉浸染液,将多余的浸染液用滤纸吸干后,重新置于预培养培养基,在暗室共培养2天。
愈伤组织诱导:将共培养后的外植体转移到新鲜的培养基上进行继代培养,以获得更多的愈伤组织。